Köszönjük, hogy felkereste a nature.com weboldalt. Az Ön által használt böngészőverzió korlátozott CSS-támogatással rendelkezik. A legjobb élmény érdekében a legújabb böngészőverzió használatát javasoljuk (vagy az Internet Explorer kompatibilitási módjának kikapcsolását). Ezenkívül a folyamatos támogatás biztosítása érdekében ez az oldal nem tartalmaz stílusokat vagy JavaScriptet.
A melamin egy elismert élelmiszer-szennyező anyag, amely bizonyos élelmiszerkategóriákban véletlenül és szándékosan is jelen lehet. Tanulmányunk célja a melamin kimutatásának és mennyiségi meghatározásának ellenőrzése volt anyatej-helyettesítő tápszerben és tejporban. Összesen 40 kereskedelmi forgalomban kapható élelmiszermintát, köztük anyatej-helyettesítő tápszert és tejport elemeztek Irán különböző régióiból. A minták hozzávetőleges melamintartalmát nagy teljesítményű folyadékkromatográfiás-ultraibolya (HPLC-UV) rendszerrel határoztuk meg. Kalibrációs görbét (R2 = 0,9925) készítettünk a melamin 0,1–1,2 μg ml−1 tartományban történő kimutatására. A mennyiségi meghatározás és a kimutatási határ 1 μg ml−1, illetve 3 μg ml−1 volt. A melamint anyatej-helyettesítő tápszerben és tejporban tesztelték, és az eredmények azt mutatták, hogy a melamin szintje az anyatej-helyettesítő tápszerben és a tejpor mintákban 0,001–0,095 mg kg−1, illetve 0,001–0,004 mg kg−1 volt. Ezek az értékek összhangban vannak az uniós jogszabályokkal és a Codex Alimentariusszal. Fontos megjegyezni, hogy ezeknek a csökkentett melamintartalmú tejtermékeknek a fogyasztása nem jelent jelentős kockázatot a fogyasztók egészségére. Ezt a kockázatértékelés eredményei is alátámasztják.
A melamin egy szerves vegyület, amelynek molekulaképlete C3H6N6, ciánamidból származik. Vízben nagyon rosszul oldódik, és körülbelül 66%-ban nitrogént tartalmaz. A melamin egy széles körben használt ipari vegyület, amelynek számos jogos felhasználási területe van műanyagok, műtrágyák és élelmiszer-feldolgozó berendezések (beleértve az élelmiszer-csomagolókat és a konyhai eszközöket) gyártásában1,2. A melamint gyógyszerhordozóként is használják betegségek kezelésére. A melaminban található magas nitrogéntartalom a vegyület helytelen használatához és a fehérjemolekulák tulajdonságainak élelmiszer-összetevőkbe való átruházásához vezethet3,4. Ezért a melamin hozzáadása az élelmiszerekhez, beleértve a tejtermékeket is, növeli a nitrogéntartalmat. Így tévesen arra a következtetésre jutottak, hogy a tej fehérjetartalma magasabb, mint amilyen valójában volt.
Minden gramm hozzáadott melamin 0,4%-kal növeli az élelmiszer fehérjetartalmát. A melamin azonban vízben nagyon jól oldódik, és súlyosabb károkat okozhat. 1,3 gramm melamin hozzáadása folyékony termékekhez, például tejhez, 30%-kal növelheti a tej fehérjetartalmát5,6. Bár a melamint állati, sőt emberi fogyasztásra szánt élelmiszerekhez is adják a fehérjetartalom növelése érdekében7, a Codex Alimentarius Bizottság (CAC) és a nemzeti hatóságok nem hagyták jóvá a melamint élelmiszer-adalékanyagként, és lenyelés, belélegzés vagy bőrön keresztüli felszívódás esetén veszélyesként sorolták be. 2012-ben az Egészségügyi Világszervezet (WHO) Nemzetközi Rákkutató Ügynöksége a melamint 2B osztályú rákkeltő anyagként sorolta fel, mivel káros lehet az emberi egészségre8. A melaminnak való hosszú távú kitettség rákot vagy vesekárosodást okozhat2. Az élelmiszerekben található melamin komplexet képezhet a cianursavval, vízben oldhatatlan sárga kristályokat képezve, amelyek károsíthatják a vese- és hólyagszövetet, valamint húgyúti rákot és fogyást okozhatnak9,10. Akut ételmérgezést, magas koncentrációban pedig halált okozhat, különösen csecsemőknél és kisgyermekeknél.11 Az Egészségügyi Világszervezet (WHO) a CAC irányelvei alapján a melamin tolerálható napi bevitelét (TDI) emberek számára napi 0,2 mg/testtömegkg-ban határozta meg.12 Az Egyesült Államok Élelmiszer- és Gyógyszerügyi Hivatala (US FDA) a melamin maximális szermaradvány-határértékét 1 mg/kg-ban határozta meg az anyatej-tápszerben és 2,5 mg/kg-ban más élelmiszerekben.2,7 2008 szeptemberében arról számoltak be, hogy több hazai anyatej-tápszergyártó melamint adott a tejporhoz, hogy növelje termékei fehérjetartalmát, ami tejpormérgezést eredményezett, és országos melaminmérgezési incidenst indított el, amelyben több mint 294 000 gyermek betegedett meg, és több mint 50 000-en kerültek kórházba.13
A szoptatás nem mindig lehetséges különféle tényezők, például a városi élet nehézségei, az anya vagy a gyermek betegsége miatt, ami a csecsemők táplálásához tápszer használatát eredményezi. Ennek eredményeként gyárakat hoztak létre az anyatejhez a lehető legközelebb álló összetételű tápszer előállítására14. A piacon kapható tápszer általában tehéntejből készül, és általában zsírok, fehérjék, szénhidrátok, vitaminok, ásványi anyagok és egyéb vegyületek speciális keverékéből készül. Annak érdekében, hogy az anyatejhez hasonló legyen, a tápszer fehérje- és zsírtartalma változó, és a tej típusától függően olyan vegyületekkel dúsítják, mint a vitaminok és ásványi anyagok, például a vas15. Mivel a csecsemők érzékeny csoportot alkotnak, és fennáll a mérgezés veszélye, a tejpor fogyasztásának biztonságossága létfontosságú az egészség szempontjából. A kínai csecsemők körében történt melaminmérgezéses eset után a világ országai kiemelt figyelmet fordítottak erre a kérdésre, és a terület érzékenysége is fokozódott. Ezért különösen fontos a tápszergyártás ellenőrzésének megerősítése a csecsemők egészségének védelme érdekében. Különböző módszerek léteznek a melamin élelmiszerekben való kimutatására, beleértve a nagy teljesítményű folyadékkromatográfiát (HPLC), az elektroforézist, az érzékszervi módszert, a spektrofotometriát és az antigén-antitest enzimhez kötött immunszorbens vizsgálatot16. 2007-ben az Egyesült Államok Élelmiszer- és Gyógyszerügyi Hivatala (FDA) kidolgozott és közzétett egy HPLC módszert a melamin és a cianursav élelmiszerekben való meghatározására, amely a melamintartalom meghatározásának leghatékonyabb módszere17.
Az anyatej-tápszerekben található melamin koncentrációját egy új infravörös spektroszkópiai technikával mérve 0,33 és 0,96 milligramm/kilogramm (mg kg-1) között mérték.18 Egy Srí Lankán végzett tanulmány a teljes tejporban 0,39 és 0,84 mg kg-1 közötti melaminszintet mutatott ki. Ezenkívül az importált anyatej-tápszer minták tartalmazták a legmagasabb melaminszintet, 0,96, illetve 0,94 mg/kg-ot. Ezek a szintek a szabályozási határérték (1 mg/kg) alatt vannak, de a fogyasztók biztonsága érdekében monitoring programra van szükség.19
Számos tanulmány vizsgálta az iráni anyatej-tápszerek melaminszintjét. A minták körülbelül 65%-a tartalmazott melamint, átlagosan 0,73 mg/kg, maximum 3,63 mg/kg mennyiségben. Egy másik tanulmány szerint a melamin szintje a csecsemőtápszerekben 0,35 és 3,40 μg/kg között mozgott, átlagosan 1,38 μg/kg-mal. Összességében a melamin jelenlétét és szintjét az iráni anyatej-tápszerekben számos tanulmányban értékelték, és egyes mintákban a melamin meghaladta a szabályozó hatóságok által meghatározott maximális határértéket (2,5 mg/kg/takarmány).
Figyelembe véve a tejpor hatalmas közvetlen és közvetett fogyasztását az élelmiszeriparban, valamint a csecsemőtápszer különleges fontosságát a gyermekek táplálásában, ez a tanulmány a melamin tejporban és anyatej-tápszerben történő kimutatási módszerének validálására irányult. Valójában a tanulmány elsődleges célja egy gyors, egyszerű és pontos kvantitatív módszer kidolgozása volt a melamin hamisításának kimutatására anyatej-tápszerben és tejporban nagy teljesítményű folyadékkromatográfia (HPLC) és ultraibolya (UV) detektálás segítségével; Másodszor, a tanulmány célja az iráni piacon forgalmazott anyatej-tápszerben és tejporban lévő melamintartalom meghatározása volt.
A melamin elemzéséhez használt eszközök az élelmiszer-előállítás helyszínétől függően változnak. A tejben és az anyatej-tápszerben található melaminmaradványok mérésére érzékeny és megbízható HPLC-UV analitikai módszert alkalmaztak. A tejtermékek különféle fehérjéket és zsírokat tartalmaznak, amelyek zavarhatják a melamin mérését. Ezért, ahogy Sun és munkatársai is megjegyzik, a műszeres elemzés előtt megfelelő és hatékony tisztítási stratégiára van szükség. Ebben a vizsgálatban eldobható fecskendőszűrőket használtunk. Ebben a vizsgálatban C18 oszlopot használtunk a melamin elválasztására az anyatej-tápszerben és a tejporban. Az 1. ábra a melamin kimutatásának kromatogramját mutatja. Ezenkívül a 0,1–1,2 mg/kg melamint tartalmazó minták kinyerése 95% és 109% között mozgott, a regressziós egyenlet y = 1,2487x − 0,005 (r = 0,9925), a relatív szórás (RSD) értékei pedig 0,8 és 2% között mozogtak. A rendelkezésre álló adatok azt mutatják, hogy a módszer megbízható a vizsgált koncentrációtartományban (1. táblázat). A melamin műszeres kimutatási határa (LOD) és mennyiségi meghatározási határa (LOQ) 1 μg ml−1, illetve 3 μg ml−1 volt. Ezenkívül a melamin UV-spektruma egy abszorpciós sávot mutatott 242 nm-en. A kimutatási módszer érzékeny, megbízható és pontos. Ez a módszer a melaminszint rutinszerű meghatározására használható.
Hasonló eredményeket több szerző is publikált. Nagy teljesítményű folyadékkromatográfia-fotodiódasoros (HPLC) módszert fejlesztettek ki a melamin tejtermékekben történő elemzésére. A mennyiségi meghatározás alsó határa 340 μg kg−1 volt tejpor és 280 μg kg−1 anyatej-tápszer esetében 240 nm-en. Filazzi és munkatársai (2012) arról számoltak be, hogy a melamin nem volt kimutatható a csecsemőtápszerben HPLC-vel. A tejporminták 8%-a azonban 0,505–0,86 mg/kg koncentrációban tartalmazott melamint. Tittlemiet és munkatársai23 hasonló vizsgálatot végeztek, és nagy teljesítményű folyadékkromatográfia-tömegspektrometria/MS (HPLC-MS/MS) segítségével a csecsemőtápszer (mintaszám: 72) melamintartalmát körülbelül 0,0431–0,346 mg kg−1-nek határozták meg. Venkatasamy és munkatársai által végzett vizsgálatban... (2010) zöld kémiai megközelítést (acetonitril nélkül) és fordított fázisú nagyteljesítményű folyadékkromatográfiát (RP-HPLC) alkalmaztak a melamin becslésére csecsemőtápszerben és tejben. A minta koncentrációtartománya 1,0 és 80 g/ml között volt, a válasz lineáris volt (r > 0,999). A módszer 97,2–101,2 közötti kinyerést mutatott az 5–40 g/ml koncentrációtartományban, a reprodukálhatóság pedig kevesebb, mint 1,0% relatív szórás. Továbbá a megfigyelt LOD és LOQ 0,1 g/ml, illetve 0,2 g/ml volt. Lutter és munkatársai (2011) HPLC-UV segítségével határozták meg a melamin szennyezettségét tehéntejben és tejalapú csecsemőtápszerben. A melamin koncentrációja < 0,2 és 2,52 mg/kg között volt. A HPLC-UV módszer lineáris dinamikus tartománya 0,05–2,5 mg kg−1 volt tehéntej, 0,13–6,25 mg kg−1 <15% fehérje tömegarányú csecsemőtápszer, és 0,25–12,5 mg kg−1 a 15% fehérje tömegarányú csecsemőtápszer esetében. Az LOD (és LOQ) eredmények 0,03 mg kg−1 (0,09 mg kg−1) voltak tehéntej, 0,06 mg kg−1 (0,18 mg kg−1) <15% fehérjetartalmú csecsemőtápszer és 0,12 mg kg−1 (0,36 mg kg−1) a 15% fehérjetartalmú csecsemőtápszer esetében, a jel-zaj arány 3 volt LOD és 1025 LOQ esetén. Diebes és munkatársai (2012) HPLC/DMD segítségével vizsgálták a melamin szintjét csecsemőtápszer és tejpor mintákban. A csecsemőtápszerben a legalacsonyabb és a legmagasabb szint 9,49 mg kg−1, illetve 258 mg kg−1 volt. A kimutatási határ (LOD) 0,05 mg kg−1 volt.
Javaid és munkatársai arról számoltak be, hogy a csecsemőtápszerben található melaminmaradványok Fourier-transzformációs infravörös spektroszkópiával (FT-MIR) 0,002–2 mg kg−1 tartományban voltak (LOD = 1 mg kg−1; LOQ = 3,5 mg kg−1). Rezai és munkatársai27 egy HPLC-DDA (λ = 220 nm) módszert javasoltak a melamin becslésére, és 0,08 μg ml−1 LOQ-t értek el tejpor esetében, ami alacsonyabb volt, mint az ebben a vizsgálatban kapott szint. Sun és munkatársai kifejlesztettek egy RP-HPLC-DAD-t a melamin folyékony tejben történő kimutatására szilárd fázisú extrakcióval (SPE). 18, illetve 60 μg kg−128 LOD-t és LOQ-t értek el, ami érzékenyebb, mint a jelenlegi vizsgálat. Montesano és munkatársai megerősítette a HPLC-DMD módszer hatékonyságát a fehérje-kiegészítők melamintartalmának meghatározásában, 0,05–3 mg/kg-os mennyiségi meghatározási határral, amely kevésbé érzékeny volt, mint az ebben a vizsgálatban alkalmazott módszer29.
Kétségtelen, hogy az analitikai laboratóriumok fontos szerepet játszanak a környezet védelmében azáltal, hogy figyelemmel kísérik a különféle mintákban található szennyező anyagokat. Azonban a nagyszámú reagens és oldószer használata az elemzés során veszélyes maradványok képződéséhez vezethet. Ezért 2000-ben kifejlesztették a zöld analitikai kémiát (GAC), hogy csökkentsék vagy kiküszöböljék az analitikai eljárások káros hatásait a kezelőkre és a környezetre26. A melamin azonosítására hagyományos melamin-kimutatási módszereket, beleértve a kromatográfiát, az elektroforézist, a kapilláris elektroforézist és az enzimhez kötött immunszorbens vizsgálatot (ELISA) alkalmaztak. A számos kimutatási módszer közül azonban az elektrokémiai érzékelők nagy figyelmet kaptak kiváló érzékenységük, szelektivitásuk, gyors elemzési idejük és felhasználóbarát tulajdonságaik miatt30,31. A zöld nanotechnológia biológiai útvonalakat használ a nanorészecskék szintetizálására, ami csökkentheti a veszélyes hulladékok keletkezését és az energiafogyasztást, ezáltal elősegítve a fenntartható gyakorlatok megvalósítását. A környezetbarát anyagokból készült nanokompozitok például bioszenzorokban használhatók olyan anyagok kimutatására, mint a melamin32,33,34.
A tanulmány kimutatta, hogy a szilárd fázisú mikroextrakció (SPME) hatékonyan alkalmazható a hagyományos extrakciós módszerekhez képest nagyobb energiahatékonysága és fenntarthatósága miatt. Az SPME környezetbarát jellege és energiahatékonysága kiváló alternatívát kínál a hagyományos extrakciós módszerekkel szemben az analitikai kémiában, és fenntarthatóbb és hatékonyabb módszert biztosít a minta-előkészítéshez35.
2013-ban Wu és munkatársai kifejlesztettek egy nagy érzékenységű és szelektív felületi plazmon rezonancia (mini-SPR) bioszenzort, amely a melamin és a melamin elleni antitestek közötti kapcsolatot használja ki a melamin gyors kimutatására csecsemőtápszerben immunvizsgálattal. Az SPR bioszenzor egy immunvizsgálattal (melaminnal konjugált marhaszérum albumint használva) kombinálva egy könnyen használható és alacsony költségű technológia, amelynek kimutatási határa mindössze 0,02 μg/ml.
Nasiri és Abbasian egy nagy potenciálú hordozható érzékelőt használt grafén-oxid-kitozán kompozitokkal (GOCS) kombinálva a melamin kereskedelmi mintákban történő kimutatására37. Ez a módszer ultramagas szelektivitást, pontosságot és választ mutatott. A GOCS érzékelő figyelemre méltó érzékenységet (239,1 μM−1), 0,01–200 μM lineáris tartományt, 1,73 × 104 affinitási állandót és akár 10 nM LOD-t mutatott. Ezenkívül Chandrasekhar és munkatársai által 2024-ben végzett tanulmány környezetbarát és költséghatékony megközelítést alkalmazott. Papaja héjkivonatot használtak redukálószerként cink-oxid nanorészecskék (ZnO-NP-k) szintéziséhez egy környezetbarát módszerrel. Ezt követően egy egyedi mikro-Raman spektroszkópiai technikát fejlesztettek ki a melamin meghatározására csecsemőtápszerekben. A mezőgazdasági hulladékból származó ZnO-NP-k értékes diagnosztikai eszközként és megbízható, alacsony költségű technológiaként bizonyították potenciáljukat a melamin monitorozására és kimutatására38.
Alizadeh és munkatársai (2024) egy nagy érzékenységű fémorganikus váz (MOF) fluoreszcens platformot használtak a melamin tejporban való meghatározására. A szenzor lineáris tartománya és alsó kimutatási határa, amelyet 3σ/S segítségével határoztak meg, 40–396,45 nM (ami 25 μg kg−1 és 0,25 mg kg−1 közötti értéknek felel meg), illetve 40 nM (ami 25 μg kg−1-nek felel meg) volt. Ez a tartomány jóval a melamin anyatej-helyettesítő tápszerben (1 mg kg−1) és más élelmiszer-/takarmánymintákban (2,5 mg kg−1) történő azonosítására meghatározott maximális szermaradék-szintek (MRL-ek) alatt van. A fluoreszcens szenzor (terbium (Tb)@NH2-MIL-253(Al)MOF) nagyobb pontosságot és precízebb mérési képességet mutatott a melamin tejporban való kimutatásában, mint a HPLC39. A zöld kémiában használt bioszenzorok és nanokompozitok nemcsak a kimutatási képességet javítják, hanem a fenntartható fejlődés elveivel összhangban minimalizálják a környezeti veszélyeket is.
A zöld kémia alapelveit számos melamin meghatározási módszerben alkalmazták. Az egyik megközelítés egy zöld diszperzív szilárd fázisú mikroextrakciós módszer kifejlesztése, amely a természetes poláris β-ciklodextrin polimert citromsavval térhálósítva használja a melamin 40 hatékony extrakciójára olyan mintákból, mint az anyatej-helyettesítő tápszer és a forró víz. Egy másik módszer a Mannich-reakciót alkalmazza a melamin tejmintákban történő meghatározására. Ez a módszer olcsó, környezetbarát és nagy pontosságú, 0,1–2,5 ppm lineáris tartománnyal és alacsony kimutatási határral 41. Továbbá egy költséghatékony és környezetbarát módszert fejlesztettek ki a melamin mennyiségi meghatározására folyékony tejben és anyatej-helyettesítő tápszerben Fourier-transzformációs infravörös transzmissziós spektroszkópiával, nagy pontossággal és 1 ppm, illetve 3,5 ppm kimutatási határral 42. Ezek a módszerek a zöld kémia alapelveinek alkalmazását demonstrálják a melamin hatékony és fenntartható meghatározási módszereinek fejlesztésében.
Számos tanulmány javasolt innovatív módszereket a melamin kimutatására, mint például a szilárd fázisú extrakció és a nagy teljesítményű folyadékkromatográfia (HPLC)43 alkalmazása, valamint a gyors nagy teljesítményű folyadékkromatográfia (HPLC), amely nem igényel komplex előkezelést vagy ionpár-reagenseket, ezáltal csökkentve a kémiai hulladék mennyiségét44. Ezek a módszerek nemcsak pontos eredményeket biztosítanak a tejtermékekben található melamin meghatározására, hanem megfelelnek a zöld kémia elveinek is, minimalizálva a veszélyes vegyi anyagok használatát és csökkentve az analitikai folyamat általános környezeti hatását.
Negyven különböző márkájú mintát vizsgáltak háromszor, az eredményeket a 2. táblázat mutatja. A melamin szintje a csecsemőtápszerben és a tejpor mintákban 0,001 és 0,004 mg/kg, illetve 0,001 és 0,095 mg/kg között volt. A csecsemőtápszer három korcsoportja között nem figyeltek meg szignifikáns változást. Ezenkívül a tejpor 80%-ában kimutattak melamint, de a csecsemőtápszerek 65%-a melaminnal szennyezett volt.
Az ipari tejpor melamintartalma magasabb volt, mint a csecsemőtápszeré, és a különbség szignifikáns (p<0,05) (2. ábra).
Az eredmények az FDA által meghatározott határértékek alatt voltak (1 és 2,5 mg/kg alatt). Ezenkívül az eredmények összhangban vannak a CAC (2010) és az EU45,46 által meghatározott határértékekkel, azaz a maximálisan megengedett határérték 1 mg kg-1 a csecsemőtápszer, és 2,5 mg kg-1 a tejtermékek esetében.
Ghanati és munkatársai 2023-as tanulmánya47 szerint Iránban a különböző típusú csomagolt tejek melamintartalma 50,7 és 790 μg kg−1 között mozgott. Eredményeik az FDA által megengedett határérték alatt voltak. A mi eredményeink alacsonyabbak, mint Shoder és munkatársai48, valamint Rima és munkatársai49 eredményei. Shoder és munkatársai (2010) azt találták, hogy a tejpor (n=49) ELISA-val meghatározott melaminszintje 0,5 és 5,5 mg/kg között mozgott. Rima és munkatársai fluoreszcens spektrofotometriával elemezték a tejporban található melaminmaradványokat, és azt találták, hogy a tejpor melamintartalma 0,72–5,76 mg/kg volt. 2011-ben Kanadában egy tanulmányt végeztek a csecsemőtápszerek (n=94) melaminszintjének monitorozására folyadékkromatográfiával (LC/MS). A melaminkoncentráció az elfogadható határérték alatt volt (előzetes szabvány: 0,5 mg kg−1). Nem valószínű, hogy a csalárd melaminszint-meghatározás a fehérjetartalom növelésére irányuló taktika lett volna. Ez azonban nem magyarázható műtrágyák használatával, a tartályok tartalmának áthelyezésével vagy hasonló tényezőkkel. Továbbá a Kanadába importált tejporban található melamin forrását sem hozták nyilvánosságra.
Hassani és munkatársai 2013-ban mérték a tejpor és a folyékony tej melamintartalmát az iráni piacon, és hasonló eredményeket kaptak. Az eredmények azt mutatták, hogy egy tejpor- és folyékony tejmárka kivételével az összes többi minta melaminnal szennyezett volt, a tejporban 1,50 és 30,32 μg g−1, a tejben pedig 0,11 és 1,48 μg ml−1 közötti szinttel. Figyelemre méltó, hogy cianursavat egyik mintában sem mutattak ki, ami csökkentette a melaminmérgezés lehetőségét a fogyasztóknál. 51 Korábbi tanulmányok a tejport tartalmazó csokoládétermékek melaminkoncentrációját vizsgálták. Az importált minták körülbelül 94%-a és az iráni minták 77%-a tartalmazott melamint. Az importált minták melaminszintje 0,032 és 2,692 mg/kg között mozgott, míg az iráni mintákban 0,013 és 2,600 mg/kg között mozgott. Összességében a minták 85%-ában mutattak ki melamint, de csak egy konkrét márka esetében volt a megengedett határérték feletti szint.44 Tittlemier és munkatársai 0,00528 és 0,0122 mg/kg közötti melaminszintről számoltak be a tejporban.
A 3. táblázat összefoglalja a kockázatértékelés eredményeit a három korcsoportban. A kockázat minden korcsoportban 1-nél kisebb volt. Így a csecsemőtápszerben található melaminnak nincs nem rákkeltő egészségügyi kockázata.
A tejtermékek alacsonyabb szintű szennyeződése az elkészítés során nem szándékos szennyeződésnek tudható be, míg a magasabb szintek szándékos adalékanyagoknak. Továbbá az alacsony melamintartalmú tejtermékek fogyasztásából eredő emberi egészségre jelentett általános kockázat alacsonynak tekinthető. Megállapítható, hogy az ilyen alacsony melamintartalmú termékek fogyasztása nem jelent kockázatot a fogyasztók egészségére52.
Tekintettel az élelmiszer-biztonsági irányítás fontosságára a tejiparban, különösen a közegészség védelme szempontjából, rendkívül fontos egy olyan módszer kidolgozása és validálása, amely lehetővé teszi a tejporban és az anyatej-tápszerben található melaminszint és -maradványok felmérését és összehasonlítását. Egy egyszerű és pontos HPLC-UV spektrofotometriás módszert fejlesztettek ki a melamin meghatározására az anyatej-tápszerben és a tejporban. A módszert validálták a megbízhatóság és a pontosság biztosítása érdekében. A módszer kimutatási és mennyiségi meghatározási határai elég érzékenynek bizonyultak ahhoz, hogy mérjék a melaminszintet az anyatej-tápszerben és a tejporban. Adataink szerint a legtöbb iráni mintában kimutatták a melamint. Az összes kimutatott melaminszint a CAC által meghatározott maximálisan megengedett határértékek alatt volt, ami azt jelzi, hogy az ilyen típusú tejtermékek fogyasztása nem jelent kockázatot az emberi egészségre.
Minden felhasznált kémiai reagens analitikai minőségű volt: 99%-os tisztaságú melamin (2,4,6-triamino-1,3,5-triazin) (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO); HPLC-minőségű acetonitril (Merck, Darmstadt, Németország); ultratiszta víz (Millipore, Morfheim, Franciaország). Eldobható fecskendőszűrők (Chromafil Xtra PVDF-45/25, pórusméret 0,45 μm, membránátmérő 25 mm) (Macherey-Nagel, Düren, Németország).
A minták előkészítéséhez ultrahangos fürdőt (Elma, Németország), centrifugát (Beckman Coulter, Krefeld, Németország) és HPLC-t (KNAUER, Németország) használtunk.
Nagy teljesítményű folyadékkromatográfot (KNAUER, Németország) használtunk, UV-detektorral felszerelve. A HPLC analízis körülményei a következők voltak: UHPLC Ultimate rendszert használtunk, amely ODS-3 C18 analitikai oszloppal (4,6 mm × 250 mm, részecskeméret 5 μm) (MZ, Németország) volt felszerelve. A HPLC eluens (mozgófázis) TFA/metanol elegy (450:50 ml) volt, 1 ml perc-1 áramlási sebességgel. A detektálási hullámhossz 242 nm volt. A befecskendezési térfogat 100 μL, az oszlop hőmérséklete 20 °C volt. Mivel a gyógyszer retenciós ideje hosszú (15 perc), a következő injekciót 25 perc elteltével kell elvégezni. A melamint a melamin standardok retenciós idejének és UV-spektrumcsúcsának összehasonlításával azonosítottuk.
Egy melamin standard oldatot (10 μg/ml) készítettünk vízzel, és hűtőszekrényben (4 °C), fénytől védve tároltuk. A törzsoldatot a mozgófázissal hígítottuk, és elkészítettük a munkaoldatokat. Minden standard oldatot 7-szer injektáltunk a HPLC-be. A 10. kalibrációs egyenletet a meghatározott csúcsterület és a meghatározott koncentráció regresszióanalízisével számítottuk ki.
Kereskedelmi forgalomban kapható tehéntejport (20 minta) és különböző márkájú tehéntej alapú anyatej-tápszer mintákat (20 minta) vásároltak helyi szupermarketekből és gyógyszertárakból Iránban különböző korcsoportú csecsemők (0–6 hónapos, 6–12 hónapos és 12 hónapnál idősebb) etetésére, és hűtőszekrényben (4 °C) tárolták az elemzésig. Ezután 1 ± 0,01 g homogenizált tejport mértek ki, és acetonitril:víz (50:50, v/v; 5 ml) eleggyel összekeverték. A keveréket 1 percig keverték, majd ultrahangos fürdőben 30 percig ultrahanggal kezelték, végül 1 percig rázták. A keveréket ezután 9000 × g-vel 10 percig szobahőmérsékleten centrifugálták, és a felülúszót egy 2 ml-es autosampler fiolába szűrték egy 0,45 μm-es fecskendőszűrő segítségével. A szűrletet (250 μl) ezután vízzel (750 μl) összekeverték, és a HPLC rendszerbe injektálták10,42.
A módszer validálásához meghatároztuk a visszanyerést, a pontosságot, a kimutatási határt (LOD), a mennyiségi meghatározás határát (LOQ) és a precizitást optimális körülmények között. Az LOD-t úgy definiáltuk, mint a minta azon részét, amelynek csúcsmagassága háromszorosa az alapzajszintnek. Másrészt, a minta azon részét, amelynek csúcsmagassága tízszerese a jel-zaj aránynak, LOQ-nak definiáltuk.
Az eszköz válaszát egy hét adatpontból álló kalibrációs görbe segítségével határoztuk meg. Különböző melamin-tartalmakat használtunk (0, 0,2, 0,3, 0,5, 0,8, 1 és 1,2). Meghatároztuk a melamin-számítási eljárás linearitását. Ezenkívül több különböző szintű melamint adtunk a vak mintákhoz. A kalibrációs görbét úgy állítottuk elő, hogy folyamatosan 0,1–1,2 μg/ml standard melaminoldatot injektáltunk anyatej-helyettesítő tápszer és tejpor mintákba, R2 = 0,9925 értéket kaptunk. A pontosságot az eljárás megismételhetősége és reprodukálhatósága alapján értékeltük, és úgy értük el, hogy a mintákat az első és a következő három napon (háromszor) injektáltuk. A módszer megismételhetőségét a hozzáadott melamin három különböző koncentrációjának RSD%-ának kiszámításával értékeltük. A pontosság meghatározásához visszanyerési vizsgálatokat végeztünk. Az extrakciós módszerrel a visszanyerés mértékét a melamin koncentrációjának három szintjén (0,1, 1,2, 2) számítottuk ki anyatej-helyettesítő tápszer és tejpor mintákban9,11,15.
A becsült napi bevitelt (EDI) a következő képlettel határoztuk meg: EDI = Ci × Cc/BW.
Ahol Ci az átlagos melamintartalom, Cc a tejfogyasztás, BW pedig a gyermekek átlagos súlya.
Az adatelemzést SPSS 24 szoftverrel végeztük. A normalitás vizsgálatához Kolmogorov-Smirnov tesztet használtunk; minden adat nemparametrikus teszt volt (p = 0). Ezért a Kruskal-Wallis tesztet és a Mann-Whitney tesztet alkalmaztuk a csoportok közötti szignifikáns különbségek meghatározásához.
Ingelfinger, Jr. A melamin és hatása a globális élelmiszer-szennyezésre. New England Journal of Medicine 359(26), 2745–2748 (2008).
Lynch, RA és munkatársai: A pH hatása a melamin migrációjára gyermekek táljaiban. International Journal of Food Contamination, 2, 1–8 (2015).
Barrett, MP és Gilbert, IH: Mérgező vegyületek célzott bejuttatása a tripanoszómák belsejébe. Progress in Parasitology 63, 125–183 (2006).
Nirman, MF és munkatársai. Melamin-dendrimerek in vitro és in vivo vizsgálata gyógyszeradagoló hordozóként. International Journal of Pharmacy, 281(1–2), 129–132(2004).
Egészségügyi Világszervezet. 1–4. szakértői ülések a melamin és a cianursav toxikológiai vonatkozásainak felülvizsgálatára (2008).
Howe, AK-C., Kwan, TH és Lee, PK-T. A melamin toxicitása és a vese. Journal of the American Society of Nephrology 20(2), 245–250 (2009).
Ozturk, S. és Demir, N. Új IMAC adszorbens fejlesztése melamin azonosítására tejtermékekben nagy teljesítményű folyadékkromatográfiával (HPLC). Journal of Food Synthesis and Analysis 100, 103931 (2021).
Chansuvarn, V., Panic, S. és Imim, A. A melamin egyszerű spektrofotometriás meghatározása folyékony tejben Mannich-zöld reakció alapján. Spectrochem. Acta Part A Mol. Biomol. Spectrosc. 113, 154–158 (2013).
Deabes, M. és El-Habib, R. Melamin meghatározása csecsemőtápszerben, tejporban és pangasius mintákban HPLC/diódasoros kromatográfiával. Journal of Environmental Analytical Toxicology, 2(137), 2161–0525.1000137 (2012).
Skinner, KG, Thomas, JD és Osterloh, JD Melamin toxicitás. Journal of Medical Toxicology, 6, 50–55 (2010).
Egészségügyi Világszervezet (WHO), A melamin és a cianursav toxikológiai és egészségügyi vonatkozásai: Jelentés a Health Canada által támogatott WHO/FAO együttműködésen alapuló szakértői találkozóról, Ottawa, Kanada, 2008. december 1–4. (2009).
Korma, SA és munkatársai. Új funkcionális szerkezeti lipideket tartalmazó csecsemőtápszer por és kereskedelmi forgalomban kapható csecsemőtápszer lipidösszetételének és minőségének összehasonlító vizsgálata. European Food Research and Technology 246, 2569–2586 (2020).
El-Waseef, M. és Hashem, H. A csecsemőtápszerek tápértékének, minőségi tulajdonságainak és eltarthatóságának javítása pálmaolajjal. Middle East Journal of Agricultural Research 6, 274–281 (2017).
Yin, W. és munkatársai. Melamin elleni monoklonális antitestek előállítása és egy közvetett, kompetitív ELISA módszer fejlesztése a melamin kimutatására nyers tejben, tejporban és állati takarmányban. Journal of Agricultural and Food Chemistry 58(14), 8152–8157 (2010).